چگونه اسلاید بافت حیوانات را تهیه می کنید؟

تهیه اسلاید بافت حیوانات یک روش اساسی در تحقیقات بیولوژیکی ، آموزش و تشخیص پزشکی است. به عنوان یک تأمین کننده اختصاصیاسلایدهای میکروسکوپ بیولوژیکیوتاسلایدهای میکروسکوپ آماده شده، من اهمیت اسلایدهای با کیفیت بالا را برای مشاهده و تجزیه و تحلیل دقیق درک می کنم. در این وبلاگ ، من شما را از طریق مرحله مرحله به مرحله تهیه اسلاید بافت حیوانات راهنمایی می کنم.

مرحله 1: مجموعه نمونه

اولین قدم برای تهیه اسلاید بافت حیوانات جمع آوری نمونه بافت مناسب است. انتخاب بافت به هدف تحقیق یا تشخیص بستگی دارد. به عنوان مثال ، اگر در حال مطالعه ساختار کبد هستید ، باید یک نمونه بافت کبد را بدست آورید. هنگام جمع آوری نمونه ، پیروی از دستورالعمل های اخلاقی و قانونی بسیار مهم است. در یک آزمایشگاه یا پزشکی ، نمونه ها اغلب از حیواناتی که به صورت انسانی قربانی شده اند یا در طی عمل جراحی بدست می آیند ، بدست می آید.

برای به دست آوردن یک قطعه کوچک از بافت ، از ابزارهای تیز و تمیز مانند پوست سر یا قیچی استفاده کنید. اندازه نمونه بافت باید برای مراحل پردازش بعدی مناسب باشد. به طور کلی ، نمونه ای که چند میلی متر ضخامت دارد و چند میلی متر مربع در منطقه کافی است. بافت جمع آوری شده را بلافاصله در یک محلول تثبیت کننده قرار دهید تا از اتوالیز (خود هضم) و فشار خون جلوگیری شود.

مرحله 2: تثبیت

تثبیت یک مرحله مهم است که ساختار بافت را حفظ می کند. تثبیت کننده ها با اتصال پروتئین ها و سایر ماکرومولکول ها در بافت کار می کنند و از تخریب آنها جلوگیری می کنند. یکی از متداول ترین تثبیت کننده ها ، فرمالدئید است که معمولاً به شکل محلول فرمالین بافر 10 ٪ خنثی است.

برای مدت مناسب نمونه بافت را در تثبیت کننده غوطه ور کنید. زمان تثبیت به اندازه و نوع بافت بستگی دارد. نمونه های بافت کوچکتر ممکن است فقط به چند ساعت تثبیت نیاز داشته باشند ، در حالی که بافت های بزرگتر یا متراکم ممکن است به یک شبه یا حتی تثبیت طولانی تر نیاز داشته باشند. در حین تثبیت ، اطمینان حاصل کنید که بافت کاملاً در تثبیت کننده غوطه ور شده است ، و ظرف برای جلوگیری از تبخیر ، محکم بسته می شود.

مرحله 3: کم آبی بدن

پس از تثبیت ، بافت حاوی مقدار قابل توجهی آب است. آب با محیط جاسازی شده مورد استفاده در مرحله بعدی ناسازگار است ، بنابراین بافت نیاز به کمبود آب دارد. کم آبی با جایگزینی به تدریج آب موجود در بافت با یک حلال آلی ، به طور معمول اتانول حاصل می شود.

با انتقال بافت ثابت به یک سری از محلول های اتانول با افزایش غلظت شروع کنید. به عنوان مثال ، می توانید از یک سری از راه حل های اتانول 30 ٪ ، 50 ٪ ، 70 ٪ ، 90 ٪ و 100 ٪ استفاده کنید. هر مرحله باید برای مدت زمان کافی طول بکشد تا اتانول بتواند به بافت نفوذ کند و آب را جایگزین کند. مدت زمان هر مرحله به اندازه و نوع بافت بستگی دارد ، اما به طور کلی ، برای هر غلظت می تواند از 30 دقیقه تا چند ساعت باشد.

مرحله 4: پاکسازی

پاکسازی فرایند از بین بردن عامل کم آبی (اتانول) از بافت و جایگزینی آن با یک ماده پاک کننده است که با محیط تعبیه قابل جابجایی است. زایلن یک ماده پاک کننده متداول است.

بافت کم آبی را به زایلن منتقل کنید. با نفوذ زایلن و جایگزین اتانول ، بافت شفاف می شود. بسته به اندازه و تراکم بافت ، زمان پاکسازی می تواند از 30 دقیقه تا چند ساعت متفاوت باشد. توجه به این نکته حائز اهمیت است که زایلن سمی است ، بنابراین تمام عملیات مربوط به زایلن باید در یک هود بخاری با تهویه انجام شود.

مرحله 5: جاسازی

تعبیه فرآیند اطراف بافت با یک محیط جامد است که پشتیبانی از بخش را فراهم می کند. موم پارافین رایج ترین محیط تعبیه شده است.

بافت پاک شده را در موم پارافین مذاب قرار دهید. بافت باید به درستی در قالب جهت گیری شود تا اطمینان حاصل شود که می توان هواپیمای مورد نظر از بخش بندی را بدست آورد. اجازه دهید موم پارافین در دمای اتاق یا در یخچال محکم شود. هنگامی که بلوک پارافین جامد شد ، می توان آن را به اندازه مناسب برای بخش بندی بریزید.

مرحله ششم: بخش بندی

بخش سازی فرآیند برش بافت تعبیه شده به برشهای نازک است. از میکروتوم برای این منظور استفاده می شود. میکروتوم را روی ضخامت بخش مورد نظر تنظیم کنید ، که معمولاً برای اکثر نمونه های بافت حیوانات بین 4 تا 10 میکرومتر است.

با استفاده از میکروتوم ، بلوک پارافین را با دقت در بخش ها برش دهید. بخش ها روی یک حمام آب در دمای کمی زیر نقطه ذوب موم پارافین شناور می شوند. این به صاف کردن بخش ها و از بین بردن هرگونه چین و چروک کمک می کند.

مرحله 7: نصب

پس از تقسیم بندی ، بخش های پارافین باید روی اسلایدهای میکروسکوپ نصب شوند. از یک اسلاید شیشه ای تمیز استفاده کنید و با استفاده از اسلاید بخشی را از حمام آب انتخاب کنید. اجازه دهید آب تبخیر شود ، و سپس اسلاید را روی یک صفحه گرم گرم قرار دهید تا به بخش پایبند به اسلاید کمک کند.

مرحله 8: deparaffinization و rehydration

قبل از رنگ آمیزی ، پارافین باید از بخش ها خارج شود و بافت نیاز به هیدراته مجدد دارد. اسلایدهای نصب شده را در زایلن قرار دهید تا پارافین برداشته شود. سپس ، اسلایدها را از طریق یک سری غلظت اتانول کاهش دهنده (100 ٪ ، 90 ٪ ، 70 ٪ ، 50 ٪ و 30 ٪) منتقل کنید تا دوباره بافت را هیدراته کنید.

مرحله 9: رنگ آمیزی

رنگ آمیزی فرایند اضافه کردن رنگ به بخش های بافت برای تقویت دید اجزای مختلف سلولی و بافت است. رنگ آمیزی هماتوکسیلین و ائوزین (H&E) متداول ترین روش رنگ آمیزی در مطالعات بافت شناسی است.

هماتوکسیلین هسته های هسته ای هسته ای - بنفش را لکه دار می کند ، در حالی که ائوزین سیتوپلاسم و ماتریس خارج سلولی صورتی را لکه دار می کند. ابتدا بخش های مجدداً با هماتوکسیلین را برای چند دقیقه لکه دار کنید. سپس اسلایدها را با آب بشویید و لکه های هماتوکسیلین را با استفاده از محلول اسید - الکل متمایز کنید. در مرحله بعد ، بخش ها را با Eosin برای مدت کوتاهی ، معمولاً چند ثانیه تا یک دقیقه لکه دار کنید.

مرحله 10: کم آبی و نصب

پس از رنگ آمیزی ، برای از بین بردن آب ، بخش های بافتی دوباره باید کم آب شوند و سپس با یک پوشش پوشش سوار شوند. اسلایدهای رنگ آمیزی شده را از طریق یک سری غلظت در حال افزایش اتانول (30 ٪ ، 50 ٪ ، 70 ٪ ، 90 ٪ و 100 ٪) برای کم آبی بدن منتقل کنید. سپس اسلایدها را به زایلن منتقل کنید تا اتانول را پاک کنید.

یک قطره از محیط نصب را روی بخش رنگ آمیزی قرار دهید و با دقت یک پوشش را روی آن قرار دهید و از تشکیل حباب های هوا جلوگیری کنید. محیط نصب به مرور زمان سخت می شود و پوشش در جای خود را در محل و محافظت از بخش رنگ آمیزی شده ایمن می کند.

کنترل کیفیت و عیب یابی

کنترل کیفیت جنبه مهمی از آماده سازی اسلاید است. اسلایدهای آماده را در زیر میکروسکوپ بررسی کنید تا از کیفیت خوبی برخوردار باشد. به دنبال علائم آثار باستانی مانند چین ها ، اشک یا رنگ آمیزی ناهموار باشید.

اگر در بخش ها چین و چاشنی وجود داشته باشد ، ممکن است به دلیل بخش بندی نادرست یا جابجایی در هنگام نصب باشد. می توانید با گرم کردن اسلاید روی صفحه داغ ، چین ها را صاف کنید. رنگ آمیزی ناهموار ممکن است در اثر دپارارافین سازی ناقص ، زمان رنگ آمیزی نادرست یا مشکلات راه حل های رنگ آمیزی ایجاد شود. در چنین مواردی ، ممکن است شما نیاز به تکرار روند رنگ آمیزی یا تنظیم شرایط رنگ آمیزی داشته باشید.

پایان

تهیه اسلاید بافت حیوانات یک فرآیند پیچیده و چند مرحله ای است که نیاز به توجه دقیق به جزئیات دارد. هر مرحله برای به دست آوردن اسلایدهای با کیفیت بالا که می توانند اطلاعات دقیقی در مورد ساختار بافت ارائه دهند بسیار مهم است. به عنوان تأمین کنندهاسلایدهای میکروسکوپ بیولوژیکیوتاسلایدهای میکروسکوپ آماده شده، ما نیازهای محققان ، مربیان و متخصصان پزشکی را درک می کنیم. اسلایدهای میکروسکوپ با کیفیت بالا ما می توانند بهترین نتیجه را در مطالعات و تشخیص شما تضمین کنند.

اگر علاقه مند به خرید اسلایدهای میکروسکوپ ما هستید یا در مورد آماده سازی اسلاید سؤالی دارید ، لطفاً برای بحث و گفتگو بیشتر با ما تماس بگیرید. ما متعهد هستیم تا بهترین محصولات و خدمات را برای تأمین نیازهای علمی خود در اختیار شما قرار دهیم.

منابع

1. Bancroft ، JD ، & Gamble ، M. (2008). نظریه و عمل تکنیک های بافت شناسی. چرچیل لیوینگستون.
2. Kiernan ، JA (2008). روشهای بافت شناسی و هیستوشیمیایی: نظریه و عمل. اسپرینگر
3. استیونز ، ا. ، و لاو ، جی. (2015). بافت شناسی انسانی. Elsevier